İçindekiler
Konjugasyon kitleri, konjugasyonu basitleştirir ve bu yüzden kimyasal uzmanlığı olmayanlar için mükemmel bir seçenektir.
Konjugasyon kitlerinin geliştirilmesi, karakteristik olarak karmaşık olan konjugasyon süreçlerini basitleştirmiş ve aşağıda açıklanan karmaşık yöntemleri uygulamak ve optimize etmek için gereken uzmanlığa sahip olmayanlar için mükemmel bir seçenek sunmuştur. En önemlisi, bu seçenek, uygun antikor ve etiket kombinasyonunu “hazır ürün” olarak kolayca bulamadığınız durumlarda faydalı olabilir.
Hızlı ve kullanımı kolay, 45’in üzerinde farklı etiketleme için konjugasyon kitleri.
Primer antikorların geleneksel yöntemlerle konjuge edilmesi, antikor kaybına neden olabilir ve laboratuvarda oldukça çok zaman alabilir. ABCAM’in yenilikçi Lighting-Link® etiketleme teknolojisi, antikorların veya proteinlerin doğrudan etiketlenmesini sağlayarak geleneksel konjugasyon sorunlarına basit bir çözüm sunar ve keşiften geliştirmeye kadar verimlilik sağlar.
Lightning-Link® antikor etiketleme teknolojisinin faydaları nelerdir?
-
- Basit ve Tutarlı: Geleneksel, konjugasyon sonrası saflaştırma adımından antikor kaybı riski olmadan antikorunuzu üç basit adımda konjuge edin.
-
- Hızlı ve Kolay: Konjugasyon kitlerimiz yalnızca 30 saniyelik çalışma süresi gerektirir, böylece araştırmanıza odaklanmak için zamanınız olur. Daha detaylı bilgi için kısa protokol videomuzu izleyin.
-
- Seçenek ve Esneklik: Deneyinizi tamamlamak için piyasadaki en geniş etiket yelpazesine erişin
-
- Ölçeklenebilir ve Verimli: 10 µg-100 mg antikorla çalışan kitlerle, deneyinizin ölçeği ne olursa olsun tutarlı konjugasyon elde edin
Lightning-Link® nasıl çalışır?
Tercih ettiğiniz antikoru veya biyomolekülünüzü ilgili etiketi içeren liyofilize karışım şişesine pipetleyin ve sadece 15 dakika (Lightning-Link® Fast ürün grubuyla) veya 3 saat (Lightning-Link® ürün grubuyla) inkübe edin.
Şekil 1. Basit Lightning-Link® protokolünü gösteren diyagram
Basit protokolüne rağmen, Lightning-Link® işlemi, antikor kaybı olmaksızın hızla tekrarlanabilir konjugatlar üretir ve size değerli zaman ve kaynaklardan tasarruf sağlar. Diğer proteinleri veya peptitleri, küçük molekülleri birleştirmek için de kullanılabilir. Antikor etiketleme kitlerimiz ve avantajları hakkında buradan bilgi edinebilirsiniz.
Lightning-Link® gibi konjugasyon kitleri, etiketlenecek antikorun istenen etiketi içeren liyofilize bir karışımın bulunduğu bir şişeye eklendiği basit, üç adımlı bir işlem kullanır. Konjuge antikor daha sonra konjugasyon sonrası saflaştırma adımlarına gerek kalmadan kullanıma hazır olur ve antikor kaybı riskini ortadan kaldırır. Şekil 2, Lightning-Link® konjugasyon kiti işlemini göstermektedir.
Bu yöntemin avantajları arasında, 10µg-100mg’lik antikor ile çalışan konjugasyon kitleri ile tekrarlanabilirlik ve ölçeklenebilirlik yer alır. Ayrıca, kitlerin sadece üç adımda nötr bir pH’ta antikor-etiket konjugatları oluşturabilmesi, uygulamalı laboratuvar süresini azaltır. Dahası, Lightning-Link® kitlerinde olduğu gibi 45’ten fazla farklı etiket yelpazesi, uygulama seçiminde ve multipleks panel geliştirmede esneklik sağlar.
Konjugasyon uygulama kılavuzunu buradan indirebilirsiniz.
Şekil 2. Lightning-Link® kiti etiketleme yöntemi.
Yüksek Kaliteli Konjugatlar Üretmek İçin Dört Temel Husus
Çoğu konjugasyon kimyasının, özellikle NHS-ester temelli yöntemlerin konjugasyon verimliliği, uygulamanız, antikor saflığı ve konsantrasyonu ile tampon bileşenleri gibi çeşitli faktörlere bağlıdır.
Yüksek kaliteli bir konjuge antikor üretmek için aşağıdaki dört adımı izleyin:
- Uygulamanız için en iyi etiketi seçin: Etiket seçimi büyük ölçüde son uygulamaya bağlı olacaktır.
- Antikorunuzun saflaştırıldığından emin olun: Sadece saflaştırılmış antikorlar konjugasyon için uygundur (yani, ham serum veya doku kültürü süpernatantı uygun değildir).
- Antikorunuzun konsantrasyonunu kontrol edin: Antikor en az 1 mg/mL olmalıdır.
- Antikorun uygun bir tampon içinde olduğundan emin olun: Bazı tampon bileşenleri etiketleme reaksiyonu ile uyumsuz olabilir (bkz. tablo 1).
Antikor konjugasyonu ile en iyi sonuçları elde etmek için, gliserol, BSA ve sodyum azit içermeyen bir tampon formülasyonunda bir antikor seçmenizi öneririz. Bu katkı maddeleri ve konjugasyon reaksiyonuna müdahale edebilecek diğer bileşenler, antikorun etiketleme verimliliğini engelleyerek düşük kaliteli konjuge antikorlara neden olacaktır.
Abcam, özellikle antikor etiketlemesi için tasarlanmış taşıyıcı içermeyen antikorlar sunar. Taşıyıcı içermeyen antikorlar, en uygun tampon formülasyonunda ve konsantrasyonda sağlandıkları için konjugasyona hazırdır. Taşıyıcı içermeyen bir antikor seçmek, saflaştırma, konsantrasyon veya tampon değişimi sonrasında gereksiz antikor kaybı nedeniyle zamandan ve maliyetten tasarruf etmenizi sağlayacaktır.
Antikorunuz yukarıda belirtilen gereksinimleri karşılamıyorsa, antikorunuzu saflaştırma ve konsantrasyon kitleri yelpazemizi kullanarak kolayca saflaştırabilir veya konsantre edebilirsiniz.
Antikorunuz bu gereksinimleri karşılamıyorsa, saflaştırma ve konsantrasyon kitlerimizi kullanarak antikorunuzu kolayca saflaştırabilir veya konsantre edebilirsiniz.
Konjugasyon işlemini olumsuz etkileyecek herhangi bir katkı maddesi içermeyen bir antikor istiyorsanız, konjugasyon kitlerimizle hemen kullanılabilen, taşıyıcı içermeyen RAbMab antikorlarımızı inceleyin.
Size en uygun antikor saflaştırma ve antikor konsantre etme kitlerini belirlememiz için bizimle iletişime geçin.
Tablo 1. Konjugasyon reaksiyonuna ve saflaştırma kitlerine müdahale edebilecek tampon formülasyon bileşenleri
|
Konjuge olmayan antikor özellikleri |
Uyumluluk |
Notlar |
|
Saflaştırılmış antikor |
Evet |
|
|
Asit sıvısı, serum, hibridoma veya doku kültürü ortamında antikor |
Hayır |
Serum Antibody Purification Kit (Protein A) (ab109209) ve Serum Antibody Purification Kit (Protein G) (ab128751), IgG fraksiyonlarını serumdan ve asit sıvısından saflaştırmak için uygundur. |
|
Antikor konsantrasyonu |
> 1mg/ml |
Antibody Concentration and Clean-Up Kit (ab102778), antikorunuzu konsantre etmek için kullanılabilir. Konsantrasyon ölçümüne müdahale edebilecek herhangi bir tampon bileşenini çıkardıktan sonra antikor konsantrasyonunuzu kontrol etmek için BCA Protein Assay Kit II (ab287853)’yi kullanın. |
|
pH |
6.5 – 8.5 |
|
|
Amin içermeyen tampon (örn. MES, MOPS, HEPES, PBS), NaCl, Borat tamponu, Şelat ajanlar (örn. EDTA), Şekerler, |
Evet |
|
|
BSA |
Sadece < %0.1, w/v |
IHC için konjuge antikor kullanmaktan kaçının; BSA, zemin boyamasına sebep olabilir. BSA Removal Kit (ab173231) kullanılabilir. |
|
Sodyum azit |
Sadece < %0.1, w/v |
HRP ile etiketleme yapıyorsanız, herhangi bir sodyum aziti çıkarın; çünkü HRP aktivitesinin geri dönülemez bir inhibitörüdür. Antibody Concentration and Clean-Up Kit (ab102778) bunun için kullanılabilir. |
|
Gliserol |
≤ %50, v/v |
Sadece %50’ye kadar konsantrasyonlarda kullanın. |
|
Jelatin |
Sadece < %0.1 |
Sadece <%0.1 konsantreasyonlarda kullanın. IHC için konjuge antikor kullanmaktan kaçının; Jelatin, zemin boyamasına sebep olabilir. |
|
Tris |
< 50 mM |
Tampondan fazla Trisi çıkarmak için Antibody Concentration and Clean-Up Kit (ab102778) kullanılabilir. |
|
Glisin |
Hayır |
Tampondan Glisini çıkarmak için Antibody Concentration and Clean-Up Kit (ab102778) kullanılabilir. |
|
Tiyomersal / Thimerosal, Mertiolat, Proclin 300, Nükleofilik bileşenler (Primer aminler örn. amino asitler veya etanolamin ve tiyoller örn. merkaptoetanol veya DTT) |
Hayır |
Lütfen belirtilen her bir konsantrasyonun konjugasyon reaksiyonunu etkilememesi gerektiğini unutmayın. Bununla birlikte, belirli bir konsantrasyonun üzerinde, önerilmeyen ek bileşiklerle birlikte kullanıldığında reaksiyon etkilenebilir.
Araştırmacılar neden konjugasyon kitlerimizi seviyor?
Lightning-Link® kitleri, araştırmacılar tarafından 750’den fazla yayında referans edilmiştir.
“R-Phycoerythrin konjugasyon kitinin kullanımı son derece kolaydı ve çok az miktarda antikor olmasına (60 µg) rağmen etkiliydi.”
Ab102918 R-PE konjugasyon kiti için araştırmacı incelemesi
“Fare numunelerinde fare primer antikoruyla immünofloresan boyama için etkili çözüm … Mouse Anti-CCX4 (ab27591) labeled with Dylight 550 Fast Conjugation Kit (ab201800)”
Ab201800 Dylight 550 Konjugasyon Kiti için araştırmacı incelemesi
“Kit, bir mağazadan satın alınan, saf, konsantre antikorla harika bir şekilde çalışıyor! Aslında, bir hücre içi boyama yaptıktan sonra Akış Sitometrisinde kullanıldığında önceki bir konjuge ikincil antikor kullanma yöntemimizden daha iyi sonuçlar verdi.”
Ab102884 FITC Konjugasyon Kiti için araştırmacı incelemesi
Konjugatlarınızı oluşturmak için tüm Lightning-Link® serisini keşfedin.
En yaygın konjugasyon kitlerimizi inceleyin:
-
- Enzimler: HRP, Alkalin Fosfataz
- Proteinler: Biyotin, Streptavidin
- Floroforlar: AF®488, AF®647 , R-PE , APC , FITC , Cy3® , Cy5®
- Tandem boyalar: PE/Cy7® , APC/Cy7® , PE/Cy5® , PerCP/Cy5.5® , PE/Cy5.5®
- Oligonükleotidler: Universal
- Metal İzotoplar: 169Tm , 141Pr , 160Gd , 175Lu , 165Ho
- Altın nanopartiküller: 40nm , 20 nm , 10 nm
Tüm antikor konjugasyon kitlerini görün
Size en uygun konjugasyon kitini ve çalışmanızda gerekiyorsa en uygun antikor saflaştırma ve antikor konsantre etme kitlerini belirlememiz için buradaki konularda bize bilgi iletmeniz yeterli.
